操作流程:
1、您收到母細胞后,請按照以下方法進行操作:
取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態,然后換用新鮮完全培養液繼續培養或進行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)待細胞完全貼壁后,觀察培養結果,之后進行換液培養或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml完全培養基重懸,接種25cm2培養瓶,于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)換用新鮮完全培養基繼續培養。
服務流程:
(1)客戶提供:目的細胞具體信息;
(2)操作過程:細胞復蘇培養,細胞發貨;
產品名稱 |
急性T細胞白血病細胞 |
規格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BH-0111578 |
英文簡稱:J.gamma1細胞
產品名稱:急性T細胞白血病細胞
規格:
傳代方法:
培養操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片完全浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們聯系。
2. 先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時(4h左右),穩定細胞狀態,切忌在溫箱內靜置過夜。
3. 靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
4. 貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內的培養基,留8ml繼續培養至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
5. 細胞瓶內的培養基含血清和雙抗,可收集后4℃保存備用,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基,一半用客戶自備的培養基,使細胞逐漸適應培養條件,以免因不適應而造成生長狀態不佳。
6. 細胞胰酶消化液建議使用PBS配制,
7. 因為細胞培養過程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過一周的細胞我們會酌情處理,但不提供免費更換服務。 細胞運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH8.0 Phosphate Buffer,0.2M, pH8.0 常溫保存 KRT7 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB 50 μg
500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH8.5 Phosphate Buffer,0.2M, pH8.5 常溫保存 KRT5 抗體, 鼠單抗 WB 50 μg
500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH9.0 Phosphate Buffer,0.2M, pH9.0 常溫保存 KRT7 / Cytokeratin-7 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IP 50 μg
500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH9.5 Phosphate Buffer,0.2M, pH9.5 常溫保存 bFGF / FGF2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA WB 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH6.5 Phosphate Buffer,0.5M, pH6.5 常溫保存 GAPDH Loading Control 抗體, 兔單抗 IHC-P 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.0 Phosphate Buffer,0.5M, pH7.0 常溫保存 GAPDH Loading Control 抗體, 鼠單抗 WB 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.2 Phosphate Buffer,0.5M, pH7.2 常溫保存 GAPDH 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.4 Phosphate Buffer,0.5M, pH7.4 常溫保存 DDX4 抗體, 鼠單抗 IHC-P 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.5 Phosphate Buffer,0.5M, pH7.5 常溫保存 GAPDH 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB IHC-P 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.6 Phosphate Buffer,0.5M, pH7.6 常溫保存 Nestin 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH8.0 Phosphate Buffer,0.5M, pH8.0 常溫保存 GJA1 抗體, 兔單抗 IHC-P 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH8.5 Phosphate Buffer,0.5M, pH8.5 常溫保存 4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體, 兔單抗 ELISA WB 50 μg
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH9.0 Phosphate Buffer,0.5M, pH9.0 常溫保存 4E-BP1 / EIF4EBP1 抗體, 兔單抗 IF ICC/IF 50 μg
急性T細胞白血病細胞NPTX1 神經 正五聚體1抗體規格: 0.1ml
phospho-NPTX1(Tyr344) 磷酸化神經 正五聚體1抗體規格: 0.1ml
CD147/TCSF/Emmprin 外基質金屬蛋白酶誘導因子抗體規格: 0.1ml
CD160/By55 NK 受體BY55抗體規格: 0.2ml
CD161 CD161抗體規格: 0.1ml
CD161c/NK1.1 CD161抗體規格: 0.2ml
CD163/M130 CD163抗體規格: 0.1ml
CD166 活化白 粘附分子抗體規格: 0.1ml
CD158a/KIR2DL1 NK 抑制性受體2DL1抗體規格: 0.2ml
CD158e NK 抑制性受體3DL1抗體規格: 0.2ml
CD158b2 NK 抑制性受體2DL3抗體規格: 0.2ml
CD158 NK 抑制性受體2DL4抗體規格: 0.2ml
CD158i NK 抑制性受體2DS4抗體規格: 0.2ml